Ảnh hưởng của thời gian thu nhận và các tác nhân tủa đến hiệu quả tinh sạch sơ bộ enzyme protease trích ly từ chủng Bacillus sp.

Abstract

This study aimed to determine the optimal conditions for the extraction and partial purification of protease from Bacillus  sp.. Protease activity was monitored from 12 to 96 hours to evaluate the effect of cultivation duration. In addition, different precipitation methods were assessed, including ethanol and acetone at extract-to-solvent ratios of 1:2, 1:3, and 1:4 (v/v), as well as ammonium sulfate precipitation at saturation concentrations from 30% to 80%. The results indicated that 72 hours post-inoculation was the optimal time point for protease recovery, with the enzyme activity reaching the highest level (62.38%). Among the purification methods tested, ammonium sulfate precipitation at 70% saturation yielded the highest enzyme recovery (558.9 U/mL) and maintained superior enzymatic activity compared to other salt concentrations and organic solvents. These findings provide valuable experimental data for developing an efficient protocol for protease production from Bacillus sp..

Tóm tắt

Nghiên cứu này nhằm xác định các điều kiện tối ưu để thu nhận và tinh sạch sơ bộ enzyme protease từ chủng Bacillus sp.. Protease được thu nhận từ dịch nuôi cấy ở các thời điểm khác nhau (12–96 giờ sau lên men) nhằm đánh giá ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến hoạt tính enzyme. Bên cạnh đó, hiệu quả của các phương pháp kết tủa khác nhau cũng được khảo sát, bao gồm sử dụng ethanol và acetone ở các tỷ lệ (dịch trích: dung môi) 1:2, 1:3 và 1:4 (v/v), cũng như kết tủa bằng ammonium sulfate ở các nồng độ bão hòa từ 30% đến 80%. Kết quả cho thấy, thời điểm 72 giờ sau nuôi cấy là tối ưu cho việc thu nhận protease, cho hoạt độ enzyme đạt mức cao nhất (660,4 U/mL). Trong các phương pháp tinh sạch sơ bộ được khảo sát, kết tủa bằng ammonium sulfate ở nồng độ bão hòa 70% cho hiệu suất thu hồi enzyme cao nhất (62,38%) và duy trì hoạt tính enzyme vượt trội so với các điều kiện còn lại. Những kết quả này cung cấp cơ sở thực nghiệm quan trọng cho việc phát triển quy trình sản xuất protease hiệu quả từ Bacillus sp..